現象

檢查方案

檢查現象/結果

可能原因

解決方法

1無樣品峰出現

檢查電流是否穩定

沒有電流

毛細管堵塞或斷裂

用水沖洗毛細管,并觀察是否有水流出,若無水流出請拆下卡盒檢查毛細管兩端和窗口是否斷裂;毛細管沒有斷裂的話可以用水反向高壓沖洗以試圖解決此問題。緩沖溶液需要過濾,將樣品過濾或者離心去除其中的顆粒。

電流波動很大,直至幾乎消失

緩沖溶液中有氣泡產生或者區帶中樣品析出

將緩沖溶液超聲脫氣,如果還有此現象發生,則可能是樣品區帶有析出,可以通過降低樣品濃度/延長ramp time來試圖解決這一問題;對于在緩沖溶液中溶解度不高的樣品則需要在緩沖溶液中加入添加劑以解決此問題。

電流初始值較小,后逐漸增大

樣品進樣量過大

減少進樣量,通常進樣參數設置在0.5psi,5sec左右

電流正常

樣品濃度過低

使用高濃度樣品測試,如果無法解決則有可能是以下其他原因

檢測波長設置不正確

請確認被分析物的特征吸收,檢查方法中的檢測波長設置

分離極性錯誤

對于蛋白樣品,請注意蛋白在分離條件下其PI及所帶電荷;對于核酸樣品,通常條件下會帶負電荷

樣品在毛細管內壁吸附

對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離,或采用極端pH條件或動態涂層防止樣品吸附。

光學檢測器或光纖損壞

進行標準樣品的測試,如果沒有對應的結果出現,則有可能存在硬件問題,請聯系工程師

檢查毛細管窗口

是否有透明窗口

忘記開毛細管窗口或窗口位置不正

重新開毛細管檢測窗口,或將窗口調整到正確位置

2 樣品峰出現拖尾

 

 

樣品在毛細管內壁吸附

對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離,或采用極端pH條件或動態涂層防止樣品吸附。

3 樣品峰形不對稱

毛細管入口

 

毛細管入口切口不平齊

重新切割毛細管入口,注意毛細管切割方法,不可以用力過猛或反復刮擦

更改樣品溶劑

 

緩沖溶液與樣品溶

液電解率差別過大

可采用緩沖溶液作為樣品溶劑

4 樣品峰過寬

降低樣品進樣量

有改善

樣品濃度太大

可降低樣品濃度或減少進樣量

無改善

樣品本身性質不均一

此原因主要是針對蛋白樣品,小分子樣品發生的概率較低

5 遷移時間不穩定

 

出峰時間不穩定且無規律

緩沖溶液與毛細管內壁平衡較慢

每次樣品運行之間避免用NaOH沖洗毛細管

出峰時間依次后延

樣品中有物質易發生吸附

首先在每次樣品運行之前用0.1N NaOH短時間沖洗毛細管,看遷移時間能否重復,如果效果不佳請使用涂層毛細管來改善結果或者將樣品再次處理,以去除樣品中易吸附的組分

6 峰形和出峰時間不穩定

更換緩沖溶液種類

峰形和時間穩定

緩沖溶液不穩定,易電解,或者是樣品在原緩沖溶液條件下不穩定

更換其它種類的緩沖溶液

峰形和出峰情況仍不穩定

樣品中物質易在毛細管內壁吸附

可采用涂層毛細管來克服此問題,或對樣品進行前處理

7 電流泄漏(Current Leakage)

檢查毛細管是否在窗口處斷裂

毛細管斷裂

毛細管內緩沖溶液流出造成電流泄漏

更換新毛細管,并用水清洗光纖頭及檢測窗口

毛細管無斷裂

實驗環境濕度過大

使用抽濕機,并打開儀器Cartridge Cover;如果沒有抽濕機可以使用空調,在濕度過大的情況下可在儀器關閉時放置干燥劑,但是在儀器運行時一定要將干燥劑取出

8 無法加氣壓

檢查瓶塞是否蓋緊或更換瓶塞

更換后問題解決

瓶塞老化,失去彈性

請購買新的瓶塞,并注意瓶塞不可烘干,只能自然晾干

瓶頸處有液體,導致瓶塞易滑

向瓶中裝液體時不要過滿,也不要沾濕瓶頸

若瓶塞無問題,可先采用真空方式,若真空方式可以使用,但壓力仍不可用

壓力系統問題

請聯系工程師

9 遷移時間可重復但峰面積重復性不好

重新切割毛細管兩端

若問題解決

毛細管入口處不平

重新切割毛細管入口,注意毛細管切割方法,不可以用力過猛或反復刮擦

問題依然存在,嘗試電動進樣

若電動進樣可保持重現,則壓力控制或氣路存在問題

請聯系工程師

10毛細管或電極易折斷

檢查瓶蓋是否老化

 

瓶蓋老化

購買新的瓶蓋

電極是否不垂直

 

電極不垂直

將電極拉直

11 冷卻液泄漏

檢查卡盒內墊圈和卡子

 

漏裝或裝錯順序

嚴格按照操作手冊上的安裝順序安裝

儀器內部管路密封不嚴

請聯系工程師

12 PDA光強低

檢測窗口Aperture型號

 

使用了窄細縫的Aperture

請在使用DAD檢測器時務必使用標有8的Aperture

13 譜圖基線不穩定

先用0.1N NaOH沖洗毛細管,然后不進樣運行原方法

基線改善

則為樣品中物質有吸附

重新預處理樣品或更改電泳條件

基線未改善

毛細管內有強烈吸附,或緩沖體系不穩定

更換新的毛細管,不進樣,只運行緩沖,觀察基線情況

更換新毛細管后基線仍然不穩,可采用Run Buffer A測試

基線改善

緩沖溶液與毛細管內壁平衡較慢

更換緩沖溶液種類,若基線變化對檢測無干擾,可保持原來電泳條件

基線無改善

檢測光源或其他光學器件不正常

請聯系工程師

2010年06月12日

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